İnsan ADAMTS2 geninin transkripsiyonel regülasyonu/ Meltem Alper;tez danışmanı Prof.Dr.Feray Köçkar.

Tez (Dok)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

ADAMTS'ler (A Disintegrin And Metalloprotease domain with ThromboSpondin type I motifs) embriyonik gelişim, anjiyogenez ve kıkırdak degredasyonu gibi önemli fizyolojik süreçlerde görev yapan metaloproteazlardır. Bu ailenin üyelerinden ADAMTS2 fibriler prokollajenlerin amino uçlarının kesilmesinde görev yapmaktadır. ADAMTS2 genindeki mutasyonlar insanlarda Ehler Danlos sendromu tip VIIC?ye neden olmaktadır. Organizma için daha birçok önemli fonksiyonu bulunan ADAMTS2?nin transkripsiyonel regülasyonunun aydınlatılması oldukça önemlidir. Bu çalışmada transkripsiyon başlangıç bölgesinden 760bç'ye kadar uzanan ADAMTS2 promotor bölgesi ve transkripsiyonel olarak en aktif bölgenin belirlenmesi amacıyla üç farklı uzunlukta [-530/+112], [-324/+112], [-180/+112] promotor parçası lusiferaz vektörüne klonlandı. Saos (insan osteosarkoma) hücrelerinde yapılan geçici transfeksiyon analizleri sonucunda bütün parçaların yüksek promotor aktivitesi gösterdiği ve transkripsiyonel aktivite için en küçük promotor parçasının yeterli olduğu belirlendi. Biyoinformatik analizlerle ADAMTS2 promotorunun 110bç'lik 5'UTR bölgesine sahip olduğu, TATA kutusu içermediği, GCkutuları, GA kutuları, CpG adaları, SP1 ve USF için bağlanma motifleri içerdiği belirlendi. Yapılan ko-transfeksiyon çalışmalarıyla USF ve SP1'in ADAMTS2 promotor aktivitesini arttırdığı belirlendi. USF'nin fonksiyonel olarak promotora bağlandığı da EMSA çalışmalarıyla belirlendi. ADAMTS2'nin çalışılan hücre hatlarında en fazla MG-63'te ve en az HUVEC'te ifade olduğu belirlendi. Saos hücrelerinde ADAMTS2 proteini immunfloresans ile işaretlendi. Ayrıca Saos hücrelerinde IL-6 ve IL-1a stimülasyonuyla ADAMTS2 ve ADAMTS3 ekspresyonunun mRNA ve protein düzeyinde arttığı qRT-PCR ve Western blot çalışmalarıyla belirlendi. Benzer MG-63 modelinde de sonuçlar doğrulandı. IL-6?nın ADAMTS2 promotor aktivitesini arttırdığı belirlendi. Saos hücrelerinde yapılan inhibisyon çalışmalarıyla IL-6'nın STAT yolunu ve de-novo protein sentezini aktive ettiği belirlendi. IL-6 sitokininin Saos hücrelerinde hücre proliferasyonuna neden olmazken IL-1a'nın hücre proliferasyonuna neden olduğu MTT çalışmalarıyla belirlendi.