İnsan PSMD4 promotorunun klonlanması ve karakterizasyonu / Gizem Güler; tez danışmanı Yrd.Doç.Dr.Sümeyye A.Türkoğlu, Prof.Dr.Feray Köçkar.

Tez (Yük)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

26S proteazom işlevini yitirmiş proteinlerin yıkımında görevli hücresel bir yapıdır. PSMD4 geni 26S proteazomun yapı birimi olan 19S düzenleyici yapı biriminde görev yapmaktadır. PSMD4 geni (26S proteazom non ATPase subunit S5A) 3 protein kodlamaktadır. Bunlardan S5A; yapısında bulunan poliubikitin bağlanma domaini sayesinde hücresel işlevini yitirmiş proteinlerin yıkımından sorumludur. ASF intestinal sıvı taşıma düzenlenmesinde işlevli kolera toksini ile indüklenen bir salgılanmış proteindir. Angiosidin proteini ise birçok tümör ve endotel hücrelerde yüksek düzeyde ifade olmaktadır. Bu protein anjiogenez ve tümör büyümesini engellemektedir. Literatürde çok işlevli protein ifadesi sağlayan bir gen olan PSMD4 hakkındaki bilgiler oldukça sınırlıdır. Tez çalışması kapsamında PSMD4 geninin transkripsiyonel düzeydeki regülasyonu ve hipoksik ile koşul ilişkisi aydınlatılmaya çalışılmıştır. Çalışma kapsamında ilk olarak Hep3B, PC-3, DU-145, MCF7, HT-29, HUVEC, MG-63, Saos-2, PANC, HeLa hücre hatlarında PSMD4'ün mRNA ve PC-3, HUVEC, Saos-2 ve Hep3B hücre hatlarında protein ifadesi belirlenmiştir. Daha sonra PSMD4 -617/+65, 261/+65 ve -85/+65 promotor bölgeleri pMetLuc lusiferaz haberci vektör sistemine klonlanmıştır. Bazal aktiviteleri geçici transfeksiyon analizleri ile belirlenmiştir. Bazal aktivitesi en yüksek promotor parçası -85/+65 bç olduğu görülmüştür. Hipoksik koşullar altında tüm promotor parçalarının aktif olduğu gözlenmiştir. Ancak en aktif yine en küçük ( -85/+65) promotor parçasının olduğu görülmüştür. Hipoksik koşullardaki değişimler mRNA, protein ve transkripsiyonel aktivite düzeyinde PC-3 ve HUVEC hücre hattında belirlenmiştir.