Karbonik anhidraz izoenzimlerinin saflaştırılması için yeni bir afinite jelinin sentezlenmesi / Gamze Ökemler; tez danışmanı Yrd.Doç.Dr.Semra Işık.

Tez (Yük)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

Bu çalışmada, tüm canlılarda bulunan ve solunum sisteminin önemli enzimlerinden biri olan karbonik anhidraz enzimi insan eritrositlerinden saflaştırılmıştır. Proteinlerin saflaştırılmasında en kolay ve kullanışlı bir teknik olan afinite kromatografisi kullanılmıştır. Çalışmamızda matriks olarak kullanılan Sepharose-4B’ye hiçbir uzantı kolu bağlanmadan sülfonamid türevi olan 4-(6-amino-hekziloksi)-benzensülfonamid, ligand olarak bağlanıp yeni bir afinite jeli sentezlenmiştir. Sentezlenen yeni afinite jeli, Sepharose-4B-4-(6-amino-hekziloksi)-benzensülfonamid kullanılarak hCA-I ve hCA-II izoenzimleri saflaştırılmıştır. Saflaştırma sonunda elde edilen hCA-I izoenzimi için verim ve saflaştırma derecesi sırasıyla % 81.3 ve 65.1 kat; hCA-II izoenzimi için verim ve saflaştırma derecesi sırasıyla % 97.8 ve 97.8 kat olarak bulunmuştur. Sentezlenen yeni afinite jelinin en uygun çalıştığı pH, sıcaklık ve iyonik şiddet değerleri, her bir CA izoenzimi için bulunmuştur. hCA-I ve hCA-II izoenzimleri için en uygun koşullar pH: 8.5, 25°C, 0.1 iyonik şiddeti olarak tespit edilmiştir. CA izoenzimlerinin elüsyonu için ise en uygun çözelti hCA-I için 50 mM Na2HPO4 / 1 M NaCl, pH: 6.3 ve hCA-II içinde 50 mM Na2HPO4 / 0.2 M KSCN, pH: 6.3 olarak belirlenmiştir. Elde edilen her CA izoenziminin saflığı, Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile kontrol edilmiştir.