Farklı Aspergillus türü funguslarda selüloz ve hemiselüloz parçalayıcı enzim aktivitelerinin incelenmesi / Aslı Tangünü; tez danışmanı Prof.Dr.Ayşe Dilek Azaz.

Tez (Yük)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

Bu çalışmada, Katı Substrat Fermentasyon (KSF) yöntemiyle yetiştirilmiş, Aspergillus caelatus NRRL 26107 ve Aspergillus oryzae NRRL 5590’ dan β-glukosidaz enzimi saflaştırılmış ve biyokimyasal karakterizasyonu yapılmıştır. Birçok biyoteknolojik uygulamalarda ticari öneme sahip, β-glukosidaz enzimi, öncelikli olarak buğday samanının KSF ortamında kullanılmasıyla yetiştirilen A.caelatus (KSF ortamının nemlendirme sıvısı pH 7,0 NaH2PO4, optimum sıcaklık 30oC ve inkübasyon süresi 7 gün) ve A.oryzae (KSF ortamının nemlendirme sıvısı pH 6,5 NaH2PO4 tamponu ile nemlendirilerek, optimum sıcaklık 25oC ve inkübasyon süresi 7 gün) suşlarından elde edilmiştir. β-glukosidaz enzimi, amonuyum sülfat çöktürmesi ve Sepharose-4B-L-Tyrosine-1-Napthylamine kullanılarak Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi ile iki basamakta saflaştırılmıştır. Çalışmamızda, β-glukosidaz enzim aktivitesi, p-nitrofenil-β-D-glukopiranosit (pNPG) substratı kullanılarak belirlenmiştir. A.caelatus β-glukosidaz (Acβ) enzimi %6,330 verimle 31,196 kat; A.oryzae β-glukosidaz enzimi (Aoβ) ise %4,350 verimle 5,855 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ve Native-PAGE ile Acβ ve Aoβ enzimlerinin molekül ağırlıkları sırasıyla 30 kDa ve 31 kDa olarak belirlenmiş olup monomerik yapıda oldukları tespit edilmiştir. Acβ ve Aoβ enzimlerin optimum pH değerleri sırasıyla 6,00 ve 5,25; optimum sıcaklık değerleri ise 65°C olarak saptanmıştır. Acβ enzimin Km ve Vmax değerleri sırasıyla 0,19 mM ve 322,58 EU; Aoβ enziminin ise 0,363 mM ve 454,54 EU olarak belirlenmiştir. Ayrıca β-glukosidaz inhibitörlerinden olan D(+)glukoz ve δ-glukonolaktonun enzimler üzerindeki etkisi araştırılmıştır. Acβ enzimi D(+)glukoz ve δ-glukonolakton inhibitörü sırasıyla yarışmasız ve yarışmalı olarak, Aoβ enzimini ise yarışmalı olarak inhibe ettikleri belirlenmiştir. Acβ enzimin D(+)glukoz inhibitörü ile IC50 ve Ki değerleri 7,65x10-2mM ve 1,42x10-1±7,31x10-2;δ-glukonolakton inhibitörü ile 7,31x10-4 mM ve 2,98x10-5±1,35x10-5 olarak; Aoβ enziminin IC50 ve Ki değerleri ise D(+)glukoz inhibitörü ile 8,80x10-2mM ve 9,58x10-4±8,02x10-5; δ-glukonolakton inhibitörü ile 4,00x10-4 mM ve 2,99x10-5±9,00x10-8, olarak hesaplanmıştır.