Katı substrat fermantasyonu ile trichoderma harzianum da selülaz üretimi,saflaştırılması ve biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi / Yaprak Alpınar ; tez danışmanı Yrd. Doç.Dr.Selma Çelen Yücetürk

Tez (Yük)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

β-glukosidaz, çeşitli temel biyolojik süreçlerde önemli rol oynamaktadır. Bu çalışmada Trichoderma harzianum NRRL 13019’ dan elde edilen β-glukosidaz enzimi amonyum sülfat çöktürmesi ve Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi (Sepharose-4B-L-Tirozin-1-Naftilamin) ile saflaştırılmıştır. β-glukosidaz enzimi, NaH2PO4 (pH 7), ile nemlendirilmiş öğütülmüş mısır koçanının substrat olarak kullanılması ile Trichoderma harzianum NRRL 13019 suşundan elde edilmiştir. Katı hal fermantasyonu ile T. harzianum NRRL 13019’ dan enzimin üretimi için optimum koşullar, 25 °C ve 7 gün olarak belirlenmiştir. T. harzianum’ dan elde edilen β-glukosidaz enzimi %18,02 verim ile 29,10 kat saflaştırılmıştır. β-glukosidaz enziminin SDS-PAGE/NATİVE-PAGE olmak üzere iki farklı elektroforez yöntemi ile saflığı ve alt birim varlığı/sayısı kontrol edilmiştir. Saflaştırılan enzim NATİVE ve SDS-PAGE üzerinde tek bir bant olarak göç etmiştir. β-glukosidaz enziminin monomerik yapıda ve 110 kDa ağırlığında olduğu belirlenmiştir. β-glukosidaz enzim aktivitesinin belirlenmesinde ise p-nitrofenil-β-D-glukopiranosit (pNPG) substratı kullanılmıştır. β-glukosidaz enziminin yüksek aktivite gösterdiği optimum pH değeri ve optimum sıcaklık değeri sırasıyla pH4 ve 65°C olarak tespit edilmiştir. β-glukosidaz enziminin Km ve Vmax değerleri sırasıyla 0,334 mM ve 3333,334 EU olarak belirlenmiştir. Lineweaver-Burk grafiğinden yararlanılarak, δ-glukonolakton ve D(+)glukozun, β-glukosidaz enzimi üzerine, pNPG substratı varlığında, sırasıyla yarışmalı ve yarışmasız tipte inhibisyon etkisi gösterdiği tespit edilmiştir. β-glukosidaz enziminin D(+)glukoz ile IC50 ve Ki değerleri 4,95 mM ve 2,6x10-3±1,42x10-3 olarak; δ-glukonolakton inhibitörü ile 8,64 mM ve 3,9x10-7±2,0x10-8 olarak hesaplanmıştır.