Endemik Salvia huberi hedge türünün polifenol oksidaz aktivitesi / Pakize Özkaya ; tez danışmanı Prof. Dr. Serap Doğan.

Tez (Yük)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

Bu çalışmada Salvia huberi HEDGE’den elde edilen polifenol oksidazın (PFO) kısmi karakterizasyonu yapılmıştır. PFO, Salvia huberi L.’den ekstrakte edilerek amonyum sülfat çöktürmesi ((NH4)2SO4) ve diyaliz yoluyla kısmen saflaştırılmıştır. PFO’nun katalizleme gücünü ve substrat spesifikliğini belirlemek üzere katekol, 4-metil katekol ve pirogallol kullanılmıştır. Enzimin optimum pH , sıcaklık ve konsantrasyonu belirlenmiştir. Ayrıca glutatyon ve askorbik asit kullanılarak inhibisyon tipleri belirlenmeye çalışılmıştır. Salvia huberi HEDGE’nin Bradford yöntemi kullanılarak protein içeriği tespit edilmiştir. PFO; katekol, 4-metil katekol ve pirogallol substratlarına karşı aktivite göstermiştir. Enzimin katalizleme gücünü gösteren VMAX/KM değerine göre en iyi substratın pirogallol olduğu ve bunu sırasıyla katekol ve 4-metil katekolün izlediği gözlemlenmiştir. Optimum pH değerlerinin sırasıyla katekol, 4-metil katekol ve pirogallol substratları için 7.5, 5.0 ve 7.5 olduğu bulunmuştur. Optimum sıcaklık değerleri katekol substratı için 10, 4-metil katekol substratı için 25 ve pirogallol substratı için 35 ºC olduğu belirlenmiştir. Optimum tampon konsantrasyonu değerleri katekol, 4-metil katekol ve pirogallol substratı için sırasıyla 60 mM, 100 mM ve 10 mM olduğu tespit edilmiştir. Bradford metoduna göre belirlenen toplam ham protein içeriğinin ise 930 μg/mL-1 olduğu belirlenmiştir. Substrat olarak katekol ve pirogallol kullanıldığında en etkin inhibitörün askorbik asit, substrat olarak 4-metil katekol kullanıldığında en etkin inhibitörün glutatyon olduğu bulunmuştur.