Ksantin oksidaz enziminin saflaştırılması ve gluteraldehit ile immobilizasyonu / Yeşim Kaya; tez danışmanı Yrd.Doç.Dr.Semra Işık.

Tez (Yük)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

Ksantin oksidaz, pürin metabolizmasında anahtar role sahip molibden içeren bir flavoproteindir. NAD+'nın rejenerasyonu, demir absorpsiyonu ve mobilizasyonu, nitratların indirgenmesi gibi biyolojik fonksiyonlara sahiptir.Bu çalışmada ksantin oksidaz enzimi afinite kromatografisi tekniğine göre Arslan O. tarafından sentezlenen Sepharose-4B-L-tirozin-4-aminobenzamidin dihidroklorür jeli ile saflaştırılmış ve gluteraldehit üzerine immobilizasyonu edilmiştir. Amonyum sülfat çöktürmesi ve afinite kromatografisi ile saflaştırılan ksantin oksidaz enzimi %11.5 verimle ve 694.04 saflaştırma derecesi ile elde edilmiştir. Enzimin saflığı SDS poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edilmiş ve 150 kDa civarında tek bant gözlenmiştir. Ksantin oksidaz enziminin kinetik sabitleri (KM ve Vmax ) ksantin bileşiği substrat olarak kullanılarak belirlenmiştir ve Lineweaver-Burk grafiğinden elde edilen KM ve Vmax değerleri sırasıyla 1.67x10-4 M ve 0.56 U/ml.dak olarak bulunmuştur. NH4F, NH4Cl, CaCl2, ZnCl2, HgCl2 ve Hg(NO3)2.H2O bileşiklerinin ve klinikte gut hastalığının tedavisinde yaygın olarak kullanılan kolşisin, ksantin oksidaz enzimi üzerindeki in vitro etkileri araştırıldığında, sırasıyla 1.42x10-4 mg/mL, 1.25x10-4 mg/mL, 0.99x10-4 mg/mL, 1.07x10-4 mg/mL, kolşisinin ise 0.27x10-4 mg/mL IC50 değerleri bulunmuştur. HgCl2 ve Hg(NO3)2.H2O bileşikleri substrat ve enzim varlığında çökelek oluşturduğundan dolayı IC50 değerleri saptanamamıştır. Enzim farklı glutaraldehit yüzdelerinde immobilize edilmiş ve enzim aktivitesi en fazla % 6 gluteraldehit oranında immobilize edilen enzimde gözlenmiştir. İmmobilize enzimin kinetik sabitleri, ksantin bileşiği substrat olarak kullanılarak Lineweaver-Burk grafiğinden elde edilmiştir. KM ve Vmax değerleri sırasıyla 5.18x10-4 M ve 0.73 U/ml.dak olarak bulunmuştur ve bu değerler, serbest enzimin katalitik etkinliğinin immobilize enzime göre daha fazla olduğunu göstermiştir.