Laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması ve bazı bileşiklerin bu enzim üzerine etkilerinin araştırılması / Beste Şipal; tez danışmanı Yrd.Doç.Dr.Semra Işık, Doç.Dr.Serap Uzunoğlu.

Tez (Dok)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

Laktoperoksidaz (LPO) enzimi (E.C.1.11.1.7) memelilerin sütünde, gözyaşında ve tükürüğünde bulunan, prostetik grup olarak hem grubu içeren bir glikoproteindir. Bu çalışmada sığır laktoperoksidaz (LPO) enzimini saflaştırmak için yeni bir afinite jeli sentezlendi. CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B matriksi üzerine uzantı kolu olarak etilendiamin bağlandı ve ligand olarak enzimin inhibitörü olan 4-izotiyosiyonat benzen sulfonamid kullanıldı. Sentezlenen bu afinite jeli ile sığır sütünden LPO enzimi saflaştırılmıştır. Enzimin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edilmiş ve 80 kDa civarında tek bant elde edilmiştir. Saf enzimin kinetik sabitleri (KM ve Vmax) Lineweaver-Burk yöntemi ile saptanmıştır. KM ve Vmax değerleri sırasıyla 1,4 mM ve 1000 U/mLdak. olarak belirlenmiştir. Farklı iyonik şiddet, pH ve sıcaklıklarda kolon şartları incelenmiştir. Bu çalışmalar sonucunda optimum şartlar şu şekilde belirlenmiştir; iyonik şiddet için dengeleme ve yıkama tamponunda Na2SO4 içermeyen, bağlanmanın en iyi olduğu pH 6 ve sıcaklık 25°C olarak belirlenmiştir.. Bazı veteriner ilaçları ve tarımda kullanılan bazı pestisitlerin enzim üzerindeki etkileri incelenmiş, inhibisyon gösteren bileşikler için IC50 değerleri saptanmıştır. Bu değerlere bakıldığında, pestisitlerin ve veteriner ilaçları türevlerinin tamamı LPO enzimini inhibe ettiği gözlenmiştir.