HEP3B Hücrelerinde VEGF sitokininin ADAMTS-1 geni üzerine etkilerinin belirlenmesi / Kubilay Tuğrul Günerhan ; tez danışmanı Prof.Dr.Feray Köçkar.

Tez (Yük)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

ADAMTS-1 (A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-1), Trombospondin tip I motifleri ile ADAM ailesi üyelerinden ayrılmakta ve günümüzde ADAMTS ailesinin ilk üyesi olarak tanımlanmaktadır. Yapılan çalışmalar ADAMTS-1‟in VEGF‟i (Vascular Endothelial Growth Factor) baskılayan bir protein olduğunu göstermektedir. Bir sitokin olan VEGF165‟in oluşturduğu sinyalin baskılanması anjiyogenezi inhibe eder ve aynı zamanda tümör şiddetini azaltır. Çalışmamızın amacı, VEGF sitokininin normal oksijen ve kimyasal indüklenmiş düşük oksijen koşullarında, ADAMTS-1, VEGF ve HIF1α gen ifadesi üzerinde etkilerinin araştırılmasıdır. VEGF165 sitokininin karaciğer kanser hücreleri üzerinde, geç saatlerde proliferatif etki gösterdiği, MTT analizi ile belirlenmiştir. Hipoksik koşullar ADAMTS-1 gen ifadesini karaciğer hücrelerinde arttırmaktadır. VEGF165 sitokini ise, ADAMTS-1 mRNA‟sını her iki koşulda da arttırmaktadır. Bu artış, immunflorasan analizleri ile protein düzeyinde de doğrulanmıştır. ADAMTS-1 promotor parçaları, HEP3B hücrelerine geçici olarak transfekte edilmiş ve VEGF165 sitokin uygulanarak traskripsiyonel aktivite belirlenmiştir. VEGF165 sitokini normal oksijen şartlarında -1415/+419 ADAMTS-1 promotor parçasında transkripsiyonel aktivitede etki göstermemiştir, ancak hipoksik şartlarda -129/+419 promotor parçasında transkripsiyonel aktivite artış göstermiştir. VEGF165 sitokinin ADAMTS-1 üzerinde etkisi, kemik kanseri modelinde mRNA düzeyinde araştırılmış, farklı bir dokuda da benzer etki gösterdiği saptanmıştır. VEGF165, HIF1α mRNA‟sını normal oksijen koşullarında bir miktar, düşük oksijen koşullarında daha fazla arttırdığı belirlenmiştir. Ayrıca, VEGF165 sitokinin, kendi mRNA‟sında önemli bir artış göstermemektedir. VEGF165‟in hangi hücre içi sinyal iletim yolundan etkisini gösterdiğinin anlaşılması için, farklı yolak inhibitörleri uygulanmış ve ADAMTS-1 üzerinde etkileri araştırılmıştır. Buna göre VEGF165, ADAMTS-1 mRNA‟sını, normal oksijen koşullarında, MAPK, PI3K ve JNK yolları üzerinden düzenlemektedir. Hipoksik koşullarda PI3K yolunu kullanmaktadır.