İnsan karbonik anhidraz-ı izoenziminin alternatif bir metot ile immobilizasyonu / İsmail Köseoğlu ; tez danışmanı Doç.Dr.Nahit Gençer.

Tez (Yük)--Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı.

Kaynakça var.

Karbonik anhidraz (CA) (E.C. 4.2.1.1) enzimi, tüm canlılarda CO2‟in hidratlanarak HCO3− ve H+‟ya dönüĢümünü terisinir olarak katalizleyen oldukça önemli bir enzimdir. Bu çalıĢmada, karbonik anhidraz enzimi izoenzimlerinden olan insan hCA-I izoenzimi, Sepharose-4B-L-tirozin-sülfonamid yapısına sahip afinite jeli ile saflaĢtırılmıĢtır ve SDS-PAGE ile saflık derecesi kontrol edilmiştir. SaflaĢtırılan CA-I izoenziminin w-aminoheksil agaroz jeli üzerine gluteraldehit ile immobilizasyonu gerçekleĢtirilmiĢtir. Ġmmobilizasyon iĢleminden sonra serbest ve immobilize CA-I enzimi için çeĢitli tayinler yapılmıĢtır. Serbest ve immobilize CA-I izoenziminin sırasıyla optimum pH‟leri 10 ve 9.5 olarak bulunmuĢtur, aktivitelerini ise sırasıyla 768; 1096 saat korumuĢlardır, optimum sıcaklıkları 35; 25 oC bulunmuĢtur, termal stabiliteleri 35; 50 oC‟lerde koruduğu görülmüĢtür. CA-I‟in klasik inhibitörlerinden sülfonamid, asetazolamid, brinzolamid, dorzolamid ve topiramat ilaçları ile inhibisyon çalıĢmaları gerçekleĢtirildi. Serbest ve immobilize CA-I izoenzimi için sırasıyla IC50 değerleri, sülfonamid için 19.083; 8.1059 mM, asetazolamid için 0.7922; 0.6655 mM, brinzolamid için 8.383; 9.539 mM, dorzolamid için 11.592; 16.618 mM, topiramat için 10.661; 16.575 mM olarak bulunmuĢtur. Brinzolamid, dorzolamid ve topiramat serbest enzimi, sülfonamid ve asetazolamid ise immobilize enzimi daha çok inhibe etmiĢtir.Karbonik anhidraz (CA) (E.C. 4.2.1.1) enzimi, tüm canlılarda CO2‟in hidratlanarak HCO3− ve H+‟ya dönüĢümünü terisinir olarak katalizleyen oldukça önemli bir enzimdir. Bu çalıĢmada, karbonik anhidraz enzimi izoenzimlerinden olan insan hCA-I izoenzimi, Sepharose-4B-L-tirozin-sülfonamid yapısına sahip afinite jeli ile saflaĢtırılmıĢtır ve SDS-PAGE ile saflık derecesi kontrol edilmiĢtir. SaflaĢtırılan CA-I izoenziminin w-aminoheksil agaroz jeli üzerine gluteraldehit ile immobilizasyonu gerçekleĢtirilmiĢtir. Ġmmobilizasyon iĢleminden sonra serbest ve immobilize CA-I enzimi için çeĢitli tayinler yapılmıĢtır. Serbest ve immobilize CA-I izoenziminin sırasıyla optimum pH‟leri 10 ve 9.5 olarak bulunmuĢtur, aktivitelerini ise sırasıyla 768; 1096 saat korumuĢlardır, optimum sıcaklıkları 35; 25 oC bulunmuĢtur, termal stabiliteleri 35; 50 oC‟lerde koruduğu görülmüĢtür. CA-I‟in klasik inhibitörlerinden sülfonamid, asetazolamid, brinzolamid, dorzolamid ve topiramat ilaçları ile inhibisyon çalıĢmaları gerçekleĢtirildi. Serbest ve immobilize CA-I izoenzimi için sırasıyla IC50 değerleri, sülfonamid için 19.083; 8.1059 mM, asetazolamid için 0.7922; 0.6655 mM, brinzolamid için 8.383; 9.539 mM, dorzolamid için 11.592; 16.618 mM, topiramat için 10.661; 16.575 mM olarak bulunmuĢtur. Brinzolamid, dorzolamid ve topiramat serbest enzimi, sülfonamid ve asetazolamid ise immobilize enzimi daha çok inhibe etmiştir.